【类型】期刊
【题名】利用基因组特异性引物和Cas12a介导技术快速检测稻瘟菌小麦致病型
【基金项目】1579
【作者】 康厚祥
【关键词】 稻瘟菌小麦致病型 田间检测 核酸侧流免疫分析 Cas12a 麦瘟病
【期刊名】Engineering
【摘要】麦瘟病由稻瘟菌小麦致病型（MoT）引起,是一种存在于南美洲和孟加拉国的毁灭性病害。由于MoT通常不会在抽穗期之前使小麦显现染病症状,但在抽穗期其侵染会一直加剧,因此仅根据肉眼观察来使用杀菌剂是无效的。为了开发一种在苗期和营养期准确、灵敏检测MoT以控制病害蔓延的方法,我们对来自巴西的两个MoT分离株的基因组进行了测序,并确定了两个DNA片段:MoT-6098和MoT-6099,它们存在于麦瘟病菌（MoT）基因组中,但不存在于感染稻瘟病菌（MoO）的水稻基因组中。利用聚合酶链反应（PCR）,我们在来自南美洲和孟加拉国的53株MoT和MoO分离株中证实了这两对标记引物的特异性。为了测试这两对标记引物的有效性,我们首先建立了一种环介导等温扩增（LAMP）方法。在等温条件下,这种方法在不使用常规PCR仪器的情况下也能检测MoT。随后,我们使用Cas12a蛋白及导向RNA（g RNAs）靶向MoT-6098和MoT-6099序列,两个靶标被识别后,均能激活Cas12a非特异切割单链脱氧核糖核酸酶（ss DNAase）的活性,我们将依赖靶向Cas12a激活ss DNase活性,同时将重组酶聚合酶扩增（RPA）和核酸侧流免疫分析法（NALFIA）相结合,开发出一种准确、灵敏且经济高效地检测受感染小麦植株中MoT特异性DNA序列的方法。这种新技术可应用于田间麦瘟病和其他重要植物病害的快速检测。
【年份】2021
【ISSN】2095-8099
【页码】279-299
【期号】9
【作者单位】1State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests,Institute of Plant Protection,Chinese Academy of Agricultural Sciences；2Department of Plant Pathology,The Ohio State University；3Institute of Biotechnology and Genetic Engineering (IBGE),Bangabandhu Sheikh Mujibur Rahman Agricultural University；4Centro de Ciências Agrárias,Universidade Federal de S?o Carlos；5Foreign Disease-Weed Science Research Unit (FDWSRU),United States Department of Agriculture-Agricultural Research Service (USDA-ARS)
【期刊卷】7
【分类号】S435.121
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