【类型】期刊
【题名】利用基因组特异性引物和Cas12a介导技术快速检测稻瘟菌小麦致病型
【作者】 康厚祥
【关键词】 麦瘟病稻瘟菌小麦致病型Cas12a核酸侧流免疫分析田间检测
【期刊名】工程
【摘要】麦瘟病由稻瘟菌小麦致病型（MoT）引起，是一种存在于南美洲和孟加拉国的毁灭性病害。由于MoT通常不会在抽穗期之前使小麦显现染病症状，但在抽穗期其侵染会一直加剧，因此仅根据肉眼观察来使用杀菌剂是无效的。为了开发一种在苗期和营养期准确、灵敏检测MoT以控制病害蔓延的方法，我们对来自巴西的两个MoT 分离株的基因组进行了测序，并确定了两个DNA 片段：MoT-6098 和MoT-6099，它们存在于麦瘟病菌（MoT）基因组中，但不存在于感染稻瘟病菌（MoO）的水稻基因组中。利用聚合酶链反应（PCR），我们在来自南美洲和孟加拉国的53株MoT和MoO分离株中证实了这两对标记引物的特异性。为了测试这两对标记引物的有效性，我们首先建立了一种环介导等温扩增（LAMP）方法。在等温条件下，这种方法在不使用常规PCR 仪器的情况下也能检测MoT。随后，我们使用Cas12a蛋白及导向RNA（gRNAs）靶向MoT-6098和MoT-6099序列，两个靶标被识别后，均能激活Cas12a非特异切割单链脱氧核糖核酸酶（ssDNAase）的活性，我们将依赖靶向Cas12a 激活ssDNase 活性，同时将重组酶聚合酶扩增（RPA）和核酸侧流免疫分析法（NALFIA）相结合，开发出一种准确、灵敏且经济高效地检测受感染小麦植株中MoT特异性DNA序列的方法。这种新技术可应用于田间麦瘟病和其他重要植物病害的快速检测。
【年份】2021
【ISSN】2095-8099
【期号】9
【作者单位】S tate Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests Institute of Plant Protection Chinese Academy of Agricultural S ciences；Department of Plant Pathology The Ohio S tate University Columbus OH 43210；Institute of Biotechnology and Genetic Engineering (IBGE) Bangabandhu S heikh Mujibur Rahman Agricultural University Dhaka 1706；Centro de Ciências Agrárias Universidade Federal de S ão CarlosAraras S P CEP 13600-000；Foreign Disease-Weed S cience Research Unit(FDWS RU) United S tates Department of Agriculture-Agricultural Research S ervice (US DA-ARS) Ft.Detrick MD 21702
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