【类型】学位论文
【题名】真菌BS-1的应用以及毒性评价
【作者】 张业扬
【关键词】 1 田间试验 培养基筛选 真菌BS 微生物多样性 冻干丸
【学位授予单位】海南大学
【摘要】真菌BS-1（Isaria Javanica）,隶属盘菌亚门（Pezizomycotina）粪菌纲（Sondariomycetes）肉座菌目（Hypocrellales）虫草科（Conlycipitaceae）棒束孢属（Isaria sp.）。真菌BS-1在室内对普通大蓟马具有较高的毒性,对二龄若虫24h的LC50为1.4×10~6个/m L,对成虫72h的LC50为6.92×10~6个/m L,96h的LC50为6.32×10~5个/m L。能在72h以内完成对普通大蓟马的成虫的侵染。本文主要研究真菌BS-1的培养基的优化、新剂型的开发、对非靶标水生生物斑马鱼和哺乳动物小鼠的毒性评价以及田间试验的药效试验。对真菌BS-1后续的应用前景有重大意义。本文的主要试验结果如下:1.本实验采用固-液两相培养的方法,进行真菌BS-1的室内繁殖,以获得大量的分生孢子。液体培养采用液体萨式培养基（SDY）,在25℃,200r/min的摇床上震荡培养48h,以获得指数期芽生孢子做母液。固体培养基的筛选,选出最佳的配方:最佳配方为配方代号7,包括水、黄豆粉、绿豆粉、玉米粉和麦麸。碳源、氮源以及无机盐的单因素试验筛选,选出最佳碳源:淀粉、氮源:蛋白胨、无机盐:K2HPO4。在此基础上在进行响应面设计优化真菌BS-1的发酵条件。2.剂型冻干丸的制作及配方筛选,筛选出冻干丸的最佳配方为脱脂牛乳、甘露醇、葡聚糖以及豆浆粉。3.真菌BS-1悬浮液对斑马鱼早期急性毒性,96 h的LC50为3.01×10~6个孢子/m L,R~2为0.942,95%的置信区间为39603.824-4.31×10~9;试验结果表明,真菌BS-1会引起斑马鱼的胚胎心率显著性增高。（p50>1×10~9个/m L,小鼠对真菌BS-1的清除率较高,呈现随着时间推移逐渐下降的趋势。在灌胃1h后,小鼠对真菌BS-1的清除率为15.8%,2 h后清除率为17.7%,4 h的清除率为18.9%,8 h的清除率为20.7%,12 h的清除率为2.5%,24 h的清除率为1.23%,48 h和72 h的清除率均为0.205%,96 h清除率为0。5.通过高通测序的方法,比较BS-1处理8 h后的小鼠与未处理的小鼠结肠肠道微生物多样性。结果表明灌胃过真菌BS-1后,真菌BS-1并没有在小鼠结肠部位定殖,这与清除率结果相一致;真菌BS-1处理过的结肠真菌多样性小幅度提高,而细菌的多样性则降低。真菌和细菌群落菌没有显著的变化。结合清除率认为真菌BS-1对于小鼠肠道微生物的多样性没有重要的影响。6.真菌BS-1冻干丸剂型的田间药效试验,试验结果表明,真菌BS-1冻干丸的田间药效在14 d达到最大,防效为69.9%,此时杀虫剂乙基多杀的防效为59.4%,金龟子绿僵菌的防效为37.4%,真菌BS-1悬浮剂的防效为42.6%。真菌BS-1冻干丸的持效期较长,在用药14 d防效高于化学杀虫剂乙基多杀、生防菌金龟子绿僵菌的防效、以及真菌BS-1悬浮剂。说明真菌BS-1冻干丸剂型具有一定的应用前景。
【学位年度】2020
【分类号】TQ460.1
【导师姓名】范咏梅
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