转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜的遗传稳定性及环境安全性分析

作者：杨子  学位年度：2022 学位授予单位：西北农林科技大学 关键词：转基因油菜 植物修复 环境安全性评价 田间漂移 

描述：土壤重金属污染是全球性问题,严重影响人类健康、作物产量和生态安全。植物修复是一种环境友好的土壤修复技术,可以改善土壤中重金属污染。植物修复中的植物提取-植物吸收重金属并将其运输到植物的组织中的地上部分-是减少土壤中重金属总量的最环保的方法,具有广泛的应用前景。超富集植物或具有生物质的高吸附转基因植物是植物提取的重要生物材料。近年来进行的植物修复的科学努力和实践表明,通过针对HMA及Nramp转运蛋白家族的转基因技术创建高吸附植物是植物修复重金属污染土壤的有力途径。在以往研究中,来自超富集植物伴矿景天Sedum pumbizincicola的三种不同的金属转运蛋白SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6被证实具有Cd转运能力。SpHMA2和SpNramp6位于质膜上,SpHMA3位于液泡膜上。重金属Cd、Pb、Cu、Zn和Mn的处理都可以强烈刺激它们的表达。为了创造潜在的植物提取生物材料,我们实验室在具有高生物量和环境适应性的K407油菜中过表达了三个单基因SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6,以及两个组合基因SpHMA2＆SpHMA3和SpHMA2＆SpNramp6,发现幼苗期的这些转基因工程油菜转运Cd和在地上部分积累Cd的能力都优于野生型油菜。并且,在混合Cd、Pb、Cu、Zn和Mn重金属污染的土壤中转基因油菜各株系的地上部分每种重金属的积累都得到了加强。这些结果为转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜成功的成为Cd和多种重金属污染土壤的植物提取材料提供了重要依据。基于以上研究成果,本研究通过分子和生理试验相结合的方法初步分析了转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜的遗传稳定性及环境安全性。取得具体研究成果如下:1.转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜目的基因具整合稳定性。通过特异性PCR技术,对转基因工程油菜各株系T1-T3代的遗传物质进行了针对主要功能元件SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因的检测。琼脂糖凝胶电泳结果显示在SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因对应bp长度区间有明显条带。并且,通过TAILPCR技术,对转基因工程油菜基因组的T-DNA插入位置的左侧和右侧的侧翼序列进行了扩增,并用高通量测序技术和BLAST技术对扩增片段进行了测序和油菜基因组碱基序列比对,成功找到了插入位置,因此可知外源基因SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6已经成功整合进入油菜基因组并能在不同时代中稳定遗传。2.转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜目的基因具有表达稳定性。通过实时定量PCR技术,对T1-T3代转基因油菜的外源基因SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6进行了相对表达水平的测定,结果显示SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因在三个世代转基因油菜各株系中都有十数倍至千倍的表达,说明SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因在转基因油菜各株系中稳定表达。3.转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜具有Cd等重金属吸附性状稳定性。测定高浓度Cd处理后野生型和T2代转基因油菜各株系单位重量的Cd含量,发现SpHMA2-OE1/OE3、SpHMA3-OE33/OE34、SpNramp6-OE1、SpHMA2＆SpHMA3-OE2和SpHMA2＆SpNramp6-OE4/OE5株系有较好的地上部分吸附Cd或转运Cd的能力。测定低浓度Cd处理盛花期土培野生型和T2代转基因油菜各株系中地上部分单位重量的Cd含量,发现除了SpNramp6-OE4外转基因油菜各株系均具有Cd高吸附能力。用激光共聚焦观察Cd处理后野生型和T3代转基因工程油菜的根、茎和叶的荧光探针强度得知转基因工程油菜地上部分的荧光强度更高,直观表明转基因工程油菜会向上转运Cd。用FE-SEM和EDAX仪分析多种重金属混合处理的野生型和T3代转基因油菜的根、茎和叶的横截面中的重金属含量,发现转基因油菜茎和叶中含量更高,初步判断转基因油菜可协同吸附Cd等多种重金属,表明这些转基因油菜具有Cd等重金属吸附性状稳定性。4.转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜生存竞争力与野生型相同。通过测定和评价野生型和T3代转基因油菜的种子萌发率和出苗率、花粉活力以及其他综合农艺性状,发现转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜在污染土壤中的传播方式和传播能力以及综合农艺性状与野生型没有区别,表明转基因过程没有影响工程油菜的生存竞争力。5.转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜靶标基因不发生基因漂移,具有环境安全性。通过特异性PCR检测技术,对盛花期转基因油菜田周围3km的杂草的遗传物质进行了针对目标基因SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6的检测。琼脂糖凝胶电泳结果显示在SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因对应bp长度区间并没有显示目标条带,说明转基因工程油菜靶标基因向环境中其他植物发生转移的可能性较小。6.转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜并不会影响田间生物的多样性。记录转基因工程油菜周围农田中昆虫数量和种类以及杂草的质量和数量相比野生型没有区别,初步判断转基因工程油菜不会改变田间生物的种群和数量,进一步说明其环境安全性。综上所述,研究证明外源基因SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6已经稳定的整合在K407油菜基因组中,可以稳定有效的转运和吸附Cd以及多种混合重金属。在环境安全性方面,转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜的传播方式和传播能力没有改变,其生长状态、生命周期和适应性也没有发生变化,其标靶基因向其他植物发生转移的可能性较小,且不会改变田间生物的种群和数量。因此,转SpHMA2、SpHMA3和SpNramp6基因工程油菜遗传稳定且环境友好,可以推广作为土壤重金属污染条件下的植物修复材料。

贺兰山东麓酿酒葡萄产区喷药机田间作业调度研究

作者：周通  学位年度：2022 学位授予单位：江苏大学 关键词：喷药机 系统集成 酿酒葡萄 改进遗传算法 田间作业调度 

描述：近年来,随着“乡村振兴”战略的提出,地方政府强调对特色农业的重点扶持。宁夏自治区借助资源禀赋和政策优势,着力推进葡萄酒及相关产业发展,逐年增大酿酒葡萄的栽种面积。截至目前,贺兰山东麓地区已成为我国酿酒葡萄集中种植最大的片区,病虫害对如此大面积酿酒葡萄的种植构成严重威胁。为了防治病虫害,该地区在喷药作业方面投入了巨大的人力、物力和财力。随着科技的进步以及社会经济的发展,贺兰山东麓地区的农业机械化水平稳步提升。但到目前为止,该区域的喷药机数量依旧有限,且存在服务水平低下、作业方式落后等问题,致使该区域的作业成本高而整体收益低。为此,如何提升喷药机的作业效率和服务水平,实现喷药机田间作业的优化调度,成为本文的研究重点。通过多次实地调研及专家访谈,本文在识别贺兰山东麓酿酒葡萄产区喷药机田间作业调度影响因素的基础上,基于传统的VRP模型,构建了喷药机田间作业调度模型,并依托改进种马遗传算法求解,最后将改进的种马遗传算法集成到酿酒葡萄生长全程机械化系统任务调度模块中,实现喷药机田间作业的智能化调度。具体的研究内容和结论如下:（1）基于传统的VRP模型,构建了喷药机田间作业调度模型。首先描述喷药机的作业过程,从而识别影响喷药机田间作业的各类因素,分析其中的关键因素,将其作为约束条件,而对非关键因素,做出一定的合理假设,以经济最优为目标建立了喷药机田间作业调度的数学模型。随后,选择了具有代表性的酒庄和具有代表性的规则与非规则田块,将障碍物、水箱、葡萄藤、作业行等考虑在内,通过Excel和Anaconda建立了简化的环境模型,便于后续的算法求解。（2）基于精英保留策略和种马逻辑改进遗传算法,求解喷药机田间作业调度模型。考虑到喷药机作业的复杂性及贺兰山东麓酿酒葡萄基地环境的复杂性,本文选择了发展较为成熟的遗传算法作为主要研究方法。基于精英保留策略和种马逻辑对传统算法进行初步改进,并在算子选择与变异概率等方面做出进一步改进。随后将求解结果与传统遗传算法、禁忌搜索算法的求解结果作比较,进而得出结论:改进的种马遗传算法在运算速度、收敛速度、以及求得的最优解方面均更具优越性。（3）将改进的种马遗传算法集成于葡萄生长全程机械化作业管理系统中,实现喷药机的智能化调度。在完成算法编写、验证及评估之后,选择将改进的种马遗传算法应用于系统集成。通过分析平台上喷药机的业务需求,画出喷药机的业务流程图,设计集成后的HIPO图,完成喷药机作业相关的数据库设计,最后通过Runtime.get Runtime（）方法将算法集成于Java平台,实现喷药机田间作业的智能管控。本文通过改进的种马遗传算法对喷药机的田间作业路径做出合理规划,使其能够实现两台喷药机协同作业,避免转弯时冲突、减少换药时的路程,进而减少总作业时间,降低作业成本。并可以通过系统平台展示规划路径,在车载显示终端上为农机手展示导航路径,提升酒庄、种植户、农机合作社的经济效益。

贺兰山东麓葡萄白粉病病原鉴定及潜育期田间宏观定量分析

作者：王雯雯  学位年度：2022 学位授予单位：宁夏大学 关键词：分子病情指数 葡萄白粉病 病原鉴定 潜育期 田间病情指数 

描述：由葡萄钩丝壳(Ucinula necator)侵染引起的葡萄白粉病，是全世界范围内葡萄生产中非常严重的病害之一，也是宁夏贺兰山东麓地区葡萄生产中重点防治和监控的对象。葡萄白粉病菌为专性寄生菌，潜育期菌量的定量检测是病害进行早期监测预警的关键环节，但目前有关葡萄白粉病菌潜育期菌量与田间病害发生的关系仍缺乏系统性研究。因此，本研究在明确贺兰山东麓地区葡萄白粉病菌基因型的基础上，建立环介导等温扩增PCR(Loop-mediated isothermal amplification，LAMP)和实时荧光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction，real-time PCR)检测体系，为葡萄白粉病菌的早期诊断提供技术支持;利用real-time PCR检测体系，分析葡萄白粉病菌潜育期的分子病情指数（molecular-detected disease index，MDI）和田间病情指数(disease index，DI)的相关性，并建立预测模型;进而利用Arc GIS技术对潜育期菌量和田间实际病情进行可视化模拟，以期为贺兰山东麓葡萄白粉病早期预警和防治提供理论依据。研究结果如下: 1.在宁夏贺兰山东麓地区7个不同葡萄种植区采集感染葡萄白粉病病叶样品，经单斑分离获得15个菌株，根据TUB2和IGS基因序列设计引物TUB2_Fw/TUB2_Rev和IGS_Fw/NS1R，分别获得了213bp和295bp的片段，进行酶切扩增多态性序列分析(Cleaved amplified polymorphic sequence，CAPS)，明确了该地区葡萄白粉病菌均为B基因型;依据CYP51基因序列设计引物Uc592/Uc946，扩增了379bp的片段，进行单链构象多态性分析(Single-Strand Conformation Polymorphism，SSCP)，明确该地区葡萄白粉病菌拥有2个亚类型（小种）。 2.根据葡萄白粉病菌的CYP51基因序列设计LAMP引物，获得了葡萄白粉病菌LAMP最佳反应条件:以UNITF3-1/UNITB3-1为外引物，UNITFIP-1/UNITBIP-1为内引物，反应体系中Bst DNA聚合酶浓度为0.32U·μL-1，甜菜碱浓度为0.8mol·L-1，dNTPs浓度为2.6mmol·L-1，Mg2+浓度为4.8mmol·L-1，内外引物配比为6∶1，在62℃反应60min，可最低检测到1pg·μL-1的葡萄白粉病菌，所建立的体系适用于田间葡萄样品的检测，反应稳定且便于操作。 3.利用葡萄F-g-6/R-g-6引物和葡萄白粉病菌F-P450-Un/R-Un引物分别建立real-time PCR检测体系，在real-time PCR技术下对葡萄叶片DNA和葡萄白粉病菌DNA经梯度稀释准确定量测定的最低检测量分别为1.0×10-2ng·μL-1和1.0×10-5ng·μL-1，分别是常规PCR的100倍和1000倍。建立葡萄叶片DNA和葡萄白粉病菌DNA的标准曲线，分别为y1=26.62-3.18x(R2=0.99637)和y2=17.44-3.03x(R2=0.99564)，标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系;利用建立的real-time PCR检测方法对30个田间样品进行检测，共检测到22个样品中含有葡萄白粉病菌，其MDI与DI存在极显著相关性，相关系数为0.916。 4.对贺兰山东麓地区3个不同生态区的3块葡萄园样地进行采样调查，利用建立的葡萄和葡萄白粉病菌real-time PCR检测体系，分析3块样地的分子病情指数(MDI)与田间调查的病情指数(DI)的相关性，结果表明:3块样地的MDI和DI存在极显著的相关性，3个样地的MDI值均与采样18d后的DI值拟合性较高(R21=0.943，R22=0.956，R23=0.966)。利用Arc GIS从空间角度模拟葡萄白粉病潜育期菌量和田间实际发生量，发现3块样地的潜育期菌量和田间发生量均显示出不同的空间结构，半变异函数为指数模型、高斯模型和球型模型，田间种群的空间格局均为聚集分布。利用MDI值和DI值构建预测模型[y=3.521x+0.684(R2=0.810)]进行18d后田间DI的预测，样地的预测DI与实际DI基本一致，符合率为96.6％。说明利用MDI可以有效地预测葡萄白粉病田间流行的程度和发生趋势，并通过Arc GIS技术实现可视化。

谷物联合收割机齿杆单动变直径脱粒滚筒的设计与试验

作者：陈立鹏  学位年度：2021 学位授予单位：江苏大学 关键词：田间性能试验 有限元分析 脱粒空间 单动变直径脱粒滚筒 

描述：脱粒装置作为联合收割机的核心部件,其工作性能将会影响整体的作业效果。传统的联合收割机在收获过程中因为植株长势、含水率等的不同导致喂入情况有较大的变动,使脱粒装置适应性差、作业性能不稳定,工作性能难以达到最佳状态。针对传统脱粒装置的局限性,研制一种可变直径的脱粒滚筒,使脱粒装置能调节脱粒齿杆的伸长量来调整脱粒间隙,提升联合收割机脱粒装置的工作性能。主要工作如下:（1）总结了四种脱粒齿杆不同伸长量的组合形式,并分析了各种组合方式所形成的不同脱粒空间,研究为齿杆单动变直径脱粒滚筒的结构设计提供了依据。（2）通过对现有变径机械结构以及非标自动化原理的深入探究,设计了包括驱动装置、伸长量调节装置、电控调节装置在内的齿杆单动变直径脱粒滚筒整体方案。基于PLC的多传感器闭环控制方案,完成了对应的程序设计。齿杆单动变直径脱粒滚筒加工装配好后进行了功能性测试,验证了伸长量装置的可行性和准确性。（3）通过ANSYS仿真分析工作状态下的脱粒滚筒的静力学特性,计算脱粒滚筒的应力应变,对机构可靠性的校核,根据有限元分析结果对齿杆单动变直径脱粒滚筒的结构改进优化,优化后的脱粒滚筒最大等效应力减少了20.6%%,最大变形量减少了32.6%,提高了结构的可靠性。（4）将齿杆单动变直径脱粒滚筒安装到联合收割机上进行田间性能试验,验证脱粒滚筒的可靠性和稳定性。通过多组田间试验,比较不同脱粒空间下的籽粒破碎率、夹带损失率、未脱净率等脱粒性能指标,探究了不同脱粒空间对脱粒装置工作性能的影响规律,试验结果表明研制的可变直径脱粒滚筒结构稳定,工作正常,能够具有较好的作业性能,,在不同的喂入量采用可变直径脱粒滚筒,选用合理的脱粒间隙,相比传统脱粒滚筒可以最大可以降低6.73%的夹带损失,减少42.4%的籽粒破碎情况,减少大约50%的未脱净情况。

语境关系顺应在记者招待会口译中的应用 研究 ——以李克强总理答记者问现场口译为例

作者：龚鑫  学位年度：2015 学位授予单位：江西师范大学 关键词：记者招待会口译 顺应论 语境关系 

描述：Verschueren的顺应性理论,覆盖了传统语用研究课题的内容,具有很强的解释力,为口译的研究提供了一个新的角度。Verschueren在顺应论中将语境分为两种,一是语言语境,包括语境衔接,互为性语境以及话语序列;二是交际语境,包括了物理世界,社交世界以及心理世界。这些语境共同影响交际的过程,而能否顺应这些语境则决定了交际的成与败。本文以2013及2014年两会中李克强总理答中外记者问的现场口译文稿为例,初步分析了Verschueren在顺应论中所提到的语境关系顺应在记者招待会口译中的应用。两会中的记者招待会是严肃的外事场合,受众多是国内外专业记者,内容涉及中国各领域的热门话题。招待会中交际的物理世界、社交世界及心理世界纷繁复杂,并且随着交际的进行不断变化。所以在这种情况下,口译员不仅要顺应语言结构,还要准确地把握语言语境,充分考虑社交语境,不断做出合适的选择,才能使交际有效进行。本文以2013及2014年总理记者招待会的口译为实例,从语言语境顺应、交际语境顺应这两个角度对口译员在口译过程中的选词、衔接及翻译策略等进行分析,尝试证明顺应论对记者招待会口译有着理论指导意义,探讨口译员在记者招待会口译中如何顺应语境以取得良好的交际效果。此外,本文提出作为交际的参与者与共建者,口译员对语境的顺应显得尤为重要。所以,译员必须加强对语境的把握和顺应能力。为了达成这个目标,口译员在平时就应当加强语言能力,增强文化意识。

评价理论框架下李克强总理政治报告的积极话语分析

作者：杜婷婷  学位年度：2016 学位授予单位：山东农业大学 关键词：技能 李克强 转换 释意 汉英同声传译 博鳌亚洲论坛 开幕式 理论视角 年会 

描述：评价理论框架下李克强总理政治报告的积极话语分析

论顺句驱动原则在会议口译中的应用——以2013年李克强总理中外记者招待会为例

作者：李睿仪  学位年度：2015 学位授予单位：华中师范大学 关键词：顺句驱动原则 李克强2013记者会 会议口译 

描述：会议口译作为一种跨文化交际的重要手段,在第二次世界大战结束之时产生,被全世界广泛的接受,尤其是在国际会议当中被广泛的使用。会议口译作为一种外事翻译,无论是对译员的翻译准确性还是表达能力各方面要求都非常高。为了使得译员能很好地表达出发言人的观点与思想,能更快更好地将句式结构复杂,内容颇多的话语完整地表达出来,利用顺句驱动原则是最好的翻译方法之一。顺句驱动原则指的是译员按听到的原语的句子顺序,把整个句子切成意群单位或信息单位,再使用连接词把这些单位自然连接起来,译出整体的意思(仲伟合,2001)。顺句驱动原则灵活性较强,在口译的过程当中,它更会侧重在意义单位基础上,只要译者将贴切的连接词附上即可。本文通过顺句驱动原则在口译当中的运用,结合李克强总理2013年中外记者招待会中,译员对这一方法的运用为例,来研究顺句驱动原则在会议口译中特别是国内外重大记者招待会中的应用。第一章主要是分析顺句驱动原则在中外记者招待会中的应用的背景以及研究意义,以此作为本篇论文的基础。第二章是对笔者在写本篇论文的过程中所做的实践活动的任务描述。第三章具体描述了顺句驱动原则在会议口译中的应用及其运用的可行性。第四章具体分析2013年李克强总理中外记者见面会的口译实例,通过对比分析笔者自己的翻译来研究顺句驱动原则在此次记者招待会中的应用。报告最后从研究和分析当中得出结论,就是顺句驱动原则作为最常用的翻译原则之一,在中外记者招待会当中具有可行性,对译员的口译起到了很大的帮助。主要体现在不仅能够有效地节省译员的时间,减少译员的记忆压力,同时还能使得句子通顺易懂并且完全符合原语所表达的思想。记者招待会的口译采用顺句驱动原则要特别注意的是,由于记者招待会具有时间限制性,译员在使用顺句驱动原则时,必须准确的抓住句子当中的重要信息来进行切分,加入适当地连接词,而不是为了节省时间盲目地对句子进行分割,从而导致逻辑混乱,既不能表达原讲话者思想,也无法使听众读懂。

论读者的接受主体性对2016年李克强《政府工作报告》英译的影响

作者：马卉  学位年度：2017 学位授予单位：浙江工商大学 关键词：汉英口译策略 目的论 模糊语 外交口译 

描述：论读者的接受主体性对2016年李克强《政府工作报告》英译的影响

论林散之诗、画与书的关系

作者：胡长春  学位年度：2007 Expression info.source is undefined on line 52, column 46 in 1/redCulture/xuewei_list.html. 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